ЛЕКЦИЯ 15
АДЕНОВИРУСЫ. ГЕРПЕСВИРУСЫ
АДЕНОВИРУСЫ
Аденовирусы как отдельные вирусные агенты были впервые описаны в 1953 г. Rowe и Hilleman, когда они пытались получить линии клеток из тканей миндалин и аденоидов, удаленных у детей. Сначала эти вирусы называли adenoid degeneration (англ. – которые вызывают дегенерацию аденоидов), adenoid – pharingeal conjunctival (англ. – аденофарингоконьюнктивальные и acute respiratory desease agents (англ. – агенты острых респираторных инфекций). На сегодня известно свыше 40 серотипив, с ними связывали разнообразные клинические синдромы. 39 из них вызывают острые респираторные заболевания, которые проявляются ринитом, фарингитом, трахеитом, шейным лимфаденитом, тонзиллитом, гипертрофией небных миндалин, коньюнктивитом и кератоконьюнктивитом. У детей дошкольного возраста аденовирусные инфекции часто осложняются бронхитом, пневмонией, даже серозным менингитом. Аденовирусы могут вызывать острые геморрагические цистити. В 1962 г. был описан первый случай, когда патогенный вирус человека индуктировал злокачественные новообразования у животных. Однако пока нет убедительных доказательств святи аденовирусов с какими-либо злокачественными опухолями человека. Аденовирусы не имеют липопротеиновой оболочки. По своей форме они напоминают икосаэдр (20 триангулярних поверхностей и 12 вершин) диаметром 65-80 нм, следовательно тип симметрии – квазисферический (кубический). От каждой из вершин отходит структурный компонент, который называется “фибриллой” (отросток) с булавовидным утолщением на свободном конце. Белковая оболочка (капсид) диаметром 70-90 нм состоит из 252 субъединиц (капсомеров), 240 из которых – гексоны, а 12 – пентоны. Пентон содержит основу пентону на поверхности капсида, от которой отходит фибрилла. Каждый пентон окружен пятью гексонами, благодаря которым он получил название “пентон”. Остальные капсомеры – гексоны, какие називают так потому, что каждый граничит с шестью другими идентичными структурами. При лизисе частей 10 % пиридином могут быть получены наномэры (группы из 9 гексонов ), при чем каждый наномэр отвечает одной из 20 триангулярних поверхностей. Гексоны и пентоны содержат разные вирусные полипептиды.
Белки аденовирусов могут быть разделены на структурные и неструктурные (растворимые), а по времени образование в клетке – на ранние и поздние. Структурные белки разнообразны по физико-химическим свойствам, антигенной специфичности и представлены белками капсида и внутренними белками. В составе вирионов идентифицировано 12 полипептидов молекулярным весом от 7 500 до 120 000 Д.
Классификация аденовирусов. Аденовирусы принадлежат к семейству Adenoviridae, которое разделяется на два рода, : Mastadenovirus (свыше 90 серологических типов) i Aviadenovirus (14 серологических типов). Род Mastadenovirus включает в себя вирусы человека, обезьян, крупного рогатого скота, коней, свиней, овец, собак, опоссумов. По характеру гемагглютинации (эти свойства имеет белок фибрилл), онкогенным потенциалом для животных, были определены такие группы, которые включают все известные аденовирусы человека.
Культивирование. В лабораторных условиях культуры клеток являются единственным субстратом, в котором аденовирусы репликуються и накапливаются в высоких титрах.
Антигенное строение. Общепринятая классификация антигенов аденовирусов основана на морфологической и иммунологической характеристике субъединиц капсида.
Термином “гексон” называют невершинный капсомер, окруженный шестью подобными структурами. Пентоном называют верхний капсомер с отростком. При определенных условиях отросток может определяться самостоятельно. Для получения изолированных капсидних белков используют ионообменную хроматографию, центрифугирование за градиентом сахарозы и др.
Гексон ( А- антиген) – имеет групповую специфичность, то есть в мономерном состоянии идентичный для таксономической группы аденовирусов. Он может быть выявлен в РЗК или реакции иммунопреципитации в геле. По данным рентгеноструктурного анализа его молекулярная масса равняется свыше 300 000 Д (аденовирус 5), он имеет полигональную форму с отверстием. Составляет основную массу белков вириона – до 51 % и представлен полипептидом П.
Отросток (С-антиген) – имеет сложную антигенную структуру, содержит типоспецифический компонент, который находится в дистальной части (головке), и компонент более широкой специфичности. Параметры его у аденовирусов разных типов значительно отличаются между собой, что свидетельствует о сложности его антигенного строения. Он способен фиксировать комплемент, формировать специфический преципитат, давать разные модификации РГА. Состоит из полипептида IV.
Пентон (В-антиген) – вызывает токсичное влияние на клетки, вызывая изменение структуры клеточного слоя, отслаивания их от стенки пробирки. Ранее его называли фактор, который вызывает отслаивание клеток, ранний цитопатогенный фактор, токсин. Пентон имеет три антигенных компонента: ( которые определяют разные виды специфичности).
Гемаглютинины. Аденовирусы способны вызывать гемагглютинацию двух видов : прямую, при которой феномен склеивания возникает при непосредственном действии на эритроциты вирусного антигена, так называемого полного гемаглютинина, и непрямую, предопределенную вирусным антигеном и специфическими антителами. Агрегация наступает в результате взаимодействия адсорбируемых на их строме молекул антигена с антителами. Антиген, который принимает в этом участие, называют неполным гемаглютинином.
Неструктурные антигены. Антигенная специфичность неструктурных белков изучена мало. Дифференцируют так называемый ранний антиген (Р) слабоонкогенних вирусов 1-го и 5-го типов, опухолевый антиген (Т), трансплантационный антигены.
Источник инфекции. Аденовирусная инфекция – широко распространенное респираторное заболевание человека, которое характеризуется подавляющим поражением слизистой оболочки органов дыхания, конъюнктив, склеры, лимфаденопатией. В возрасте 6 мес.- 1 год инфицируется до 30-60 % детей. Самые чувствительные к аденовируснои инфекции дети 0,5-2 лет. Источник инфекции – больной человек или вирусоноситель. Носительство может длиться 3 -9 месяцев.
Механизм заражения. Основной механизм заражения – воздушно-капельный. Входными воротами при респираторной форме болезни являются верхние дыхательные пути. Инкубационный период длится от 1 до 13 дней. Длительность выделения вирусов из носоглотки равняется длительности болезни, порой на 2-3 дня меньше.
Патогенез. Аденовирусы репродуцируются в эпителии верхних дыхательных путей, в клетках которых выявляют характерные внутриядерные базофильные ДНК-содержащие включения и скопления аденовирусного антигена. Чаще аденовирусы вызывают острые респираторные заболевания (фарингиты, ларингити, трахеобронхиты). Порой аденовирусы бронхогенным или гематогенным путем попадають в легкие, вызывая тяжелые очаговые или интерстициальные пневмонии, особенно у детей и лиц преклонных лет (серовар 3, 4, 7, 14).
Достаточно часто наблюдают явление персистенции аденовирусов. Она приводит к затяжному ходу инфекционного процесса, который проявляется в виде хронических тонзилитив, гайморитив, пневмоний.
Иммунитет. После перенесенной болезни развивается типоспециффический достаточно стойкий иммунитет. Основной механизм его – образования вируснейтрализирующих антител, которые имеют защитное действие, так как существует прямая зависимость между наличием таких антител и стойкостью организма к инфекции. У новорожденных материнские антитела исчезают к шестимесячному возрасту, однако у детей 2-3 лет уже находят антитела к нескольким серотипам вирусов.
В сыворотке лиц, которые переболели, сначала выявляют IgM, потом IgG, IgA, в носовом секрете находят иммуноглобулины классов SIgA и IgG.
Лабораторная диагностика. Лабораторную диагностику осуществляют по таким основным направлениям. Во-первых, выявление скоплений специфического вирусного антигена в клетках цилиндрического эпителия верхних дыхательных путей с помощью методов иммунофлюоресценции и ИФА; в испражнениях – с помощью иммунной электронной микроскопии. Во-вторых, выделения вирусов проводят в чувствительной культуре клеток с дальнейшим типированием в РН и РГГА. Материалом для исследования могут быть смывы из ротоглотки, ануса, мазки из коньюнктивы, в некоторых случаях – кровь.
В-третьих, серодиагностика. Выявления нарастания титра противовирусных антител осуществляют при исследовании парных сывороток в РН, РЗК, РГГА.
Противовирусная терапия и профилактика. Для лечения используют препараты, которые специфически действуют на аденовирусы. Перспективными в этом плане являются аналоги метаболитив нуклеиновых кислот 6-азауридин, азагуанин, йоддезоксиуридин, а также ДНК-аза. При кератитах и коньюнктивитах эффективен интерферон.
Известны формоловая и живая атенуированная вакцины против аденовирусов отдельных типов. Они отличаются высокой иммуногенностью и ареактинивностью. Изучается возможность изготовления вакцины из отдельных капсидних белков аденовирусов. Неспецифическая профилактика такая же что проводится при других респираторных инфекциях: рекомендуют ограничительные, санитарно-гигиенические и дезинфекционные мероприятия. Среди них изоляция больных, разъединение людей, проветривание помещений, закалка и тому подобное.
ГЕРПЕСВИРУСЫ
Принадлежность к семейству Herpesviridae определяется наличием в составе вириона двунитевой линейной ДНК, икосаедричного капсида из 162 капсомеров, сбор которого происходит в ядре, и оболочки, которая образуется из ядерной мембраны.
Герпесвирусы широко распостранены в природе. Среди высших еукариотив редко встречаются такие, которые не могли бы быть зараженными хотя бы одним представителем этого семейства. Известно около 80 в разной степени охарактеризованных вирусов герпеса: шесть из них выделено от человека: вирус простого герпеса 1 (Herpes simplex virus 1), вирус простого герпеса 2 (Herpes simplex virus 2), цитомегаловирус (Cytomegalovirus), вирус ветреной оспы, опоясывающего герпеса (Herpes zoster virus – Varicella virus), вирус Епштейна-Барр (Epstein – Barr virus), вирус герпеса человека 6 (Herpesvirus 6). Вирусы выделяют от коней, коров, свиней (вирус псевдобешенства и цитомегаловирус), кур (герпесвирус болезни Марека и вирус инфекционного ларинготрахеита).
Классификация. Представители семейства Herpesviridae разделены на основании их биологических свойств на три подсемейства – Alphaherpesvirinae, Betaherpesvirinae, Gammaherpesvirinae.
Члены подсемейства Alphaherpesvirinae характеризуются широким спектром хозяев, в это подсемейство входит Simplexvirus (HSV – 1, HSV – 2, вирус мамилита крупного рогатого скота) и Poikilovirus (PSV, VZV, вирус герпеса коней).
Для вирусов подсемейства Betaherpesvirinae характерен ограниченный спектр хозяев. В состав семейства входят роды Cytomegalovirus и Muromegalovirus (цитомегаловирус мышей).
Для Gammaherpesvirinae (EBV, HV – 6, MDV) спектр хозяев, который устанавливается экспериментально, ограничен животными тех видов, от которых выделен естественный вирус. In vitro эти вирусы способны реплицироваться в лимфобластоидных клетках, вызывают литическую инфекцию в эпителиоидных клетках и фибробластах. Вирусы этой группы проявляют тропизм или к Т-, или к В-лимфоцитам, однако часто инфекционный процесс останавливается на прелитичной стадии, то есть потомки отсутствуют.
Вирусы простого герпеса (Herpes simplex virus)
Вирусы простого герпеса впервые выявлены (1912) в жидкости герпетических везикул. Позже Lеvenstein (1919) показал способность этого вируса вызывать кератит у кроликов и поражать роговицу человека.
Морфология и ультраструктура. Вирион вируса герпеса состоит из четырех структурных элементов: непрозрачной для электронов сердцевины; окружающего сердцевину икосадельтаедричного капсида; асимметрично расположенного вокруг капсида материала, который обозначается как тегумент (покрыл), и внешней мембраны, или оболочки (толщиной 5-10 нм), окружающей капсид и тегумент. На поверхности внешней оболочки выявлены отростки длиной 8-10 нм. Размер вирионов в среднем равняется 180-200 нм. Капсид у всех вирусов герпеса имеет ряд общих признаков: до 100 нм в диаметре и состоит из 162 капсомеров. Пентамерные капсомеры находятся на вершинах икосаэдра, а гексамерные – на поверхности капсида.
Тегумент на тонких срезах не видно, однако при негативном контрастировании он выглядит как волокнистый материал, толщина которого зависит от места накопления вириона в клетках (если вирус находится в цитоплазматической вакуоле, его больше, а если в перинуклеарном пространстве – меньше).
Большинство штаммов вируса герпеса не вызывают гемагглютинацию, однако некоторые агглютинируют эритроциты гусей. Вирус может быть выявлен в РПГА с эритроцитами барана, обработанными танином.
Известна дифференциация вирусов герпеса простого на два типа. Вирусы 1-го типа повреждают слизистую оболочку и кожу, вирусы 2-го типа – инфицируют гениталии. Оба типа возбудителей отличаются по некоторым другим свойствам: способностью к размножению и трансформации определенных клеток, характером морфологических изменений в зараженных клетках, свойствами белков, в частности, тимидинкинази, составом нуклеотида ДНК.
Репродукция вирусов. Заражение начинается из прикрепления вирусов к клеточным рецепторам, природа которых еще не выяснена. Попытки найти клетки животных, которые не имеют рецепторов к HSV не привели к успеху, однако кроме человека “естественный” путь заражения может происходить только в шимпанзе. Окончательно не выяснена и природа вирусных антирецепторов. При 37ºС 90 % вирионов адсорбируются на клетке за 45 хв. Инфекционные свойства вирусы приобретают только на стадии образования внешней оболочки, “голые” вирусные части не имеют их”.Голые” вирусные части появляются в ядре через 5-6 часов после заражения, через час уже находят зрелые вирионы с внешней оболочкой. Пик инфекционности наблюдается через 12 часов после инфицирования. Выход вирусов в среднем равняется 60000 вирионов на клетку, однако значительная их часть (до 75 %) представлена пустыми капсидами без внешней оболочки. Клетки, которые произвольно заражаются вирусами, не выживают.
Культивирование. Вирусы простого герпеса, как правило, размножаются во многих культурах разного происхождения (эмбриональные ткани человека, куриные фибробласты, почки обезьян, кроликов, поросят), а также в перепрививаемых линиях VERO, HeLa, Hep – 2, Детройт-6. Чувствительнее всего первичная культура почек кролика и культура клеток VERO.
Самое яркое проявление герпетической инфекции в культуре клеток – образование цитопатического эффекта и формирование внутриядерных включений (телец Липшютца). Цитопатическое действие проявляется образованием синцитиев и округлением клеток, слипанием и формированием конгломератов. Целость монослоя нарушается. Симпластообразующий фактор – это гликопротеид, который синтезируется в клетке и не является структурным компонентом вириона.
Вирус герпеса существенно влияет на митотический аппарат. Игибирование митозов – одно из первых проявлений вирусной инфекции. Деление клеток прекращается сразу после прикрепления вирусов.
Вирус способен вызывать хромосомные аберрации в диплоидных линиях клеток: наблюдаются разрывы хромосом (чаще всего Х, 1-й). Считается, что такая способность предопределена действием ранних ферментов вирусов, в частности ДНК- азы.
Патогенность. К вирусу гепесу чувствительны кролики, мыши, гвинейские свинки, суслики, хлопчатниковые крысы, односуточные цыплята, голуби, гуси, куриные эмбрионы. Новорожденные мышонки чувствительнее всего к ним.
ВГ-1 вызывает острый герпес, гингивостоматит (Венсана), герпетическую экзему, кератоконьюнктивит, менингоэнцефалит, герпес лабиалис. ВГ-2 предопределяет возникновение генитального герпеса, герпеса новорожденных, врожденных пороков, раневого герпеса, герпеса дантистов, герпеса борцов.
Эпидемиология и патогенез болезни. Простой герпес – инфекционное заболевание, которое характеризуется поражением разных органов и систем (кожа, слизистые, глаза, нервная система), которое проявляется в основном возникновением везикулярних высыпаний на ограниченных участках кожи и слизистых оболочек. Естественным источником вируса гепеса простого относится человек. Вируснейтрализующие антитела выявлены в сыворотке 75-90 % взрослых.
Основные входные ворота – кожа и слизистые. Вирус проникает через слизистую губ, ротовой полости, коньюнктиву или гениталии и преимущественно размножается в месте проникновения. Дальнейшее распространение вируса происходит гематогенным путем, или по нервным путям. При первичном инфицировании или рецидивах он оказывается в разных органах, легко выделяется из жидкости герпетических везикул, может быть выделен из форменних элементов. Проникнув в организм, вирус остается там в течение жизни и между рецидивами хранится в клетках базального слоя эпидермиса, слюнных или слизистых железах, в лимфатических узлах. Способен храниться в ганглиях n. trigeminus. Механизм латентной инфекции, возможно, предопределенный персистуванням в организме вирусной нуклеиновой кислоты, которая не имеет белковой оболочки. Некоторые данные свидетельствуют о существовании интеграционного механизма.
Невзирая на широкую распространенность вируса, пути передачи изучены мало. Герпетическая инфекция передается крапельним путем. Редко встречается контактное инфицирование через травмированную кожу или слизистые.
Зарегистрированы небольшие эпидемические вспышки в детских заведениях, семььях и спорадические случаи болезни.
Иммунитет. В крови большинства здоровых людей выявляют в высоких титрах вируснейтрализуючи антитела, которые образуются в ответ на первичное инфицирование, которое часто имеет бессимптомный ход. На фоне выраженного гуморального иммунитета возникают рецидивы заболевания в результате действия неблагоприятных факторов на организм. Известная трансплацентарная передача вируснейтрализуючих антител, которые хранятся в течение 6 мес. Найдено разрушение клеток, которые содержат вирусный антиген, под воздействием антител в присутствии комплемента. Кроме того, инфицированные клетки могут фагоцитироваться и разрушаться полиморфноядерными лейкоцитами.
Лабораторная диагностика. Вирусологический метод заключается в выделении вирусов из герпетических пузырьков, слюны, цельной крови или форменних элементов, спинномозговой жидкости, пузырьков на поверхности роговицы, тканей головного мозга и других внутренних органов.
Для индикации вирусов в материале от больного разработаны реакция обратной пассивной гемагглютинации (РОПГА), в которой эритроциты обрабатывают противогерпетическим Ig G. Цитологичний метод основан на выявлении внутриядерных включений в мазках или срезах поврежденных органов. Для этого используют метод иммунофлюоресценции. Мазок содержимого герпетических везикул окрашивают специфической флюоресцирующей сывороткой, а потом в ядрах и цитоплазме эпителиальных клеток выявляют вирусный антиген.Серологические методы исследования (РН, РНГА, РЗК) применяются при диагностике первичных форм герпетической инфекции.
Порой используют накожную аллергическую пробу.
Специфическая терапия. Для лечения герпетической инфекции разработанные способы специфической терапии. Для этого используют галогенизированные аналоги тимидина (5-йод-2-дезоксиурацил, цитозин-арабинозид). Первый выпускается в виде мази флореналь. Перспективные препараты – производные фосфоруксусной кислоты – ингибиторы вирусной ДНК-полимерази в клетке. Широко используются ацикловир (зовиракс), вайдарабин, оксолин, реаферон, лаферон.
Противоэпидемические мероприятия. Специфическая профилактика применяется в случаях тяжелого течения болезни и для предупреждения слепоты при рецидивирующих кератитах. Разработаны инактивированные вакцины, защитное действие которых изучается. Используется специффический иммуноглобулин.
Из-за тяжести хода первичного герпеса в новорожденных применяют мероприятия профилактики в роддомах, детских заведениях.
Вирус ветреной оспы-опоясывающего герпеса
Вирус ветреной оспы (varicella, chichen – pox) вызывает инфекционное заболевание с характерной папуло-везикулезной сипью, которое сопровождается лихорадкой, и наблюдается, в основном, у детей. Заболевание, которое вызывает возбудитель, у взрослых характеризуется поражением межпозвонковых ганглиев и чувствительных спинномозговых нервов.
Ветреная оспа – одна из самых распространенных инфекций человека, уступая место только кори. Заболеваемость еще до недавнего времени составляла до 82,8 на 10 000 населения.
Строение, размеры вирусов ветреной оспы типичны для вирусов герпеса. Вирус содержит линейную двуспиральную ДНК, содержимое Г+Ц складывает 46 %, удельная плотность – 1, 705 гсм3.
Культивирование. Вирусы можно культивировать в первичных и перепрививаемых культурах клеток человеческого происхождения. В клетках они вызывают цитопатический эффект очагового характера с образованием внутриядерных включений, которые чаще еозинофильни.
Антигенная структура. Вирусы, которые выделены от больных ветреной оспой и опоясывающим герпесом, имеют идентичные антигенные особенности.
Комплементзвязывающий антиген выявляют в инфицированной культуральной жидкости и жидкости везикул. Гемаглютинирующих и гемадсорбирующих свойств не выявлено.
Эпидемиология и патогенез болезни. Единственным источником инфекции является больной человек. Ветреной оспой чаще всего болеют дети 1-3 лет. Болезнь характеризуется сезонностью, рост числа заболеваний наблюдается в осенне-зимний период. Опоясывающий герпес также достаточно распространенное заболевание, которое будет поражать приблизительно 22, 5 из 10 000 лиц. Вирус ветреной оспы проникает через слизистую верхних дыхательных путей, болезнь передается воздушно-капельным путем. В клетках слизистой вирус размножается. Инкубационный период составляет 10-21 день, продромальный период короткий. Больные ветреной оспой становятся заразными за несколько часов до появления сыпи. С места проникновения вирус лимфатическими путями проникает в кровь. Патологический процесс развивается, в основном, в эпителии кожи, реже на слизистых, предопределяя появление везикулярнои сыпи и волдырьков по всему теле. Именно в них и содержится вирус. Волдырек небольшой, с некрозом эпидермиса, его развитие завершается всасыванием жидкости и образованием корки. На слизистых дыхательных путей образуется енантема, похожая к натуральной оспе. Мацерация пленки, которая покрывает волдырек, превращает его на корку. Тогда вирус, который содержится в волдырьке, может передаваться кашлем, чиханием. Основными входными воротами для вируса герпеса зостер являются кожа и слизистая оболочка дыхательных путей. Вирус также распространяется гематогенным и лимфогенным путем с дальнейшей локализацией преимущественно в задних корешках, задних рогах и межпозвонковых ганглиях спинного мозга.
Много данных свидетельствует о связи заболеваний на ветреную оспу и опоясывающий герпес. Считается, что при первичном заражении развивается ветреная оспа, а опоясывающий герпес является результатом активации латентного вируса – это будто-то вторая стадия варицельозной инфекции.
Лабораторная диагностика. С помощью РИФ вирусный антиген выявляют в мазках-отпечатках из везикул. Для выделения вирусов чаще всего используют фибробласты кожно-мышечной ткани эмбриона человека, диплоидные клетки и культуру почечной ткани человека. Самой чувствительной является культура клеток щитовидной железы человека. Высокочувствительными методами выявления вирусных антигенов являются РОНГА, РЗК.
Для серологической диагностики используют РЗК. Антитела появляются с 8-го дня болезни, достигая высоких титров через три недели.
Разработана внутрикожная аллергическая проба.
С целью специффического лечения используют иммуноглобулин, который получают из крови реконвалесцентов, облегчающее течение заболевания, и интерферон.
Противоэпидемические мероприятия. Введение иммуноглобулина против вируса ветреной оспы является эффективным методом профилактики заболевания при условии госпитализации больных. Описаны способы получения и успешного применения атенуированной живой вакцины.
Больных ветреной оспой следует изолировать (в домашних условиях) от детского коллектива. Изоляция прекращается через 5 дней после появления последнего элемента сыпи. Карантин накладывается на 21 день.
Вирус цитомегалии человека
Синонимы названия этого возбудителя – вирус слюнных желез, вирус болезни с цитомегаличними включениями. Цитомегаловирусной инфекции человека присущий латентный ход. Она широко распространена в человеческой популяции – от 28 % до 100 % лиц являются сероположительными к этому возбудителю. Однако у некоторых больных, особенно новорожденных, развивается острый процесс с поражением нервной системы и внутренних органов.
Строение вирусов и их химический состав. Строение и размеры цитомегаловирусив типичные для вирусов группы герпеса. В них различают линейную двуспиральную ДНК молекулярной массой 64х104 Д, капсид и внешнюю оболочку. В составе вириона найдено 33 структурных белка, из каких 11 составляют гликопротеиды.
Реакця вируса на физические и химические агенты. Вирус инактивируется при 56 ºС в течение 10-20 хв, чувствителен к замораживанию и следующему оттаиванию. Сравнительно стабилен при рН 5,0-9,0, разрушается при рН 3,0, чувствителен к эфиру и другим растворителям липидов.
Репродукция вирусов. Вирус репродуцируется очень медленно, небольшие количества внеклеточного вируса могут быть выявлены через 2-5 суток после заражения.
Культивирование. Цитомегаловируси имеют четко выраженный видовой тропизм и in vitro накапливаются в тканевых культурах, выделенных только от естественных хозяев. Невзирая на выраженную епителиотропность в макроорганизме, in vitro вирусы репродуцируются интенсивнее в фибробластах. Чаще всего используют ткани эмбриона человека, фибробластов миометрию, диплоидные клетки легких эмбриона человека. Спустя некоторое время развивается цитопатический эффект в виде гигантских клеток с включениями. В ядрах появляются вирусные частицы трех типов в зависимости от того, сколько оболочек они имеют – одну, две или три. Порой включения наблюдаются в цитоплазме. Тогда они состоят из зрелых вирионов, окруженных, наверное, лизосомами, которые поглощают вирусы. Это в свою очередь предопределяет низкую инфекционность вирусов. В непосредственной близкости от очагов поражения наблюдается рост частоты патологических форм митозив.
Патогенность. Вирус цитомегалии человека апатогенный для лабораторных животных. Четкая видоспецифичность приближается к вирусу ветреной оспы и отличает его от вирусов герпеса простого.
Антигенная структура. Выделяют два типа вирусов, дифференцировать которые можно в РН. При репродукции вирусов образуется комплементзвязующий антиген, который имеет более широкую специфичность по сравнению с первым. Вирус цитомегалии не имеет гемаглютинирующих и гемолитических свойств, не дает феномена гемадсорбции.
Эпидемиология и патогенез заболевания. Источником цитомегаловирусной инфекции является больной человек. Для этого заболевания характерен контактный и крпельний механизм заражения. Длительное выделение вирусов с мочой в течение нескольких месяцев и даже лет, а также со слюной взрослых и детей имеет большое эпидемиологическое значение. Общепризнанным является трансплацентарный механизм передачи. Вот почему эта болезнь чрезвычайно опасна при беременности.
Она может быть причиной недонашивания беременности, мертвонароджуваности, врожденных пороков, задержки умственного развития ребенка. Характерным является развитие менингоэнцефалита, поражения епендими желудочков, мозга, зрительного нерва, легких, печенки, почек. Только у детей первых месяцев жизни цитомегалия определяется как самостоятельная болезнь. Цитомегалия у взрослых наблюдается редко. Генерализация ее у детей старшего возраста и взрослых сопровождает другие тяжелые болезни.
Чаще всего активация персистирующей инфекци происходит в онкологических клиниках, отделах трансплантации, где используется большое количество иммунодепрессантов, цитостатиков, у больных СПИДом и тому подобное.
Различают две формы болезни: локализованную (с поражением слюнных желез и латентным ходом) и генерализированную.
Иммунитет. При внутриутробном заражении в организме плода появляются IgM и IgG. IgG передаются трансплацентарно от матери и циркулируют у ребенка в течение 4-6 месяцев.
У взрослых специфические иммуноглобулины также хранятся длительное время. В разных группах обследованных выявлены от 35 до 72 % лиц с антителами против цитомегаловируса, что свидетельствует о широком распространении инфекции.
Лабораторная диагностика. Инфицирование, которое не всегда приводит к заболеванию, может быть выявлено на основании выделения вирусов, нахождения клеток с включениями и увеличения титра IgG -антитил, которое выявляют в РЗК. Наличие комплементзвязывющих антител в титре 1:8 и выше свидетельствует о внутриутробном или постнатальном заражении. Специфическая терапия и профилактика не разработаны. Терапия направлена на повышение сопротивляемости организма: витаминотерапия, введение иммуноглобулинов.
Вирус Епштейна-Барр
Вирус Епштейна-Барр (ВЕБ) – герпесвирус человека 4-го типа. Впервые было выявлено его во время электронно-микроскопического исследования клеток злокачественной лимфомы Беркита.
За морфологическими и другими физико-химическими свойствами он подобен вирусам простого герпеса и других герпесвирусов человека. ВЕБ будет поражать В-лимфоциты, другие клетки лимфоидной и ретикулярной тканей человека, способен долго храниться в клетках хозяина, который приводит к развитию латентной инфекции. ВЕБ в отличие от других герпесвирусов способен не разрушать, а стимулировать размножение инфицированных В-лимфоцитов, в то же время он персистирует в них и активно размножается. ВЕБ культивируются только в лимфоцитах, где развивается или продуктивная инфекция с образованием полноценного вируса, или абортивная, с синтезом вирусных компонентов и неполных вирусных частей. Полноценная репродукция вируса происходит только в В-лимфоцитах.
ВЕБ может поражать эпителиальные клетки слизистой оболочки верхних дыхательных путей и пищеварительного канала, а также клетки лимфоидной и ретикулоэндотелиальной ткани, вызывая продуктивную инфекцию. В этом случае развивается инфекционный мононуклеоз, в других, когда поражаются В-лимфоциты, они трансформируются, становятся злокачественными, в результате чего развивается злокачественная лимфома Беркита или назофарингеальная карцинома. То есть вирус способен вызывать разные заболевания. В странах с умеренным климатом – это инфекционный мононуклеоз, а в странах тропического пояса – злокачественная лимфома Беркита, в Юго-восточной Азии – карцинома носоглотки. Пока что не поняло, почему один и тот же вирус вызывает такие процессы. В ВИЧ инфицированных людей происходит активация латентной Веб-инфекции, которая приводит к образованию лимфомы или карциномы. У лиц с нарушением иммунной системы ВЕБ вызывает лейкоплакию оболочек языка, полости рта, красной каймы губ, влагалища и шейки матки.
Инфекционный мононуклеоз (ИМ, болезнь Филатова-Пфейффера, kiss disease – болезнь поцелуя, моноцитарная ангина, острый доброкачественный лимфобластоз) – острое вирусное заболевание, для которого характерны генерализированная лимфаденопатия (прежде всего поражаются шейные лимфатические узлы), повышение температуры, ангина, гепатомегалия и спленомегалия, появление в крови атипичных мононуклеаров. Источником инфекции является больной человек с типичными или стертыми проявлениями болезни.
ВЕБ передается воздушно-капельным или контактно-бытовым путем, а также во время переливания крови, контаминированной вирусом. Считается, что ИМ – болезнь малоконтагиозна. Основными факторами передаваемости инфекции является слюна, секрет из носоглотки, кровь. Вирус выделяется со слюной в продромальном и остром периоде болезни, во время периода реконвалесценции, часто на протяжении 6 и больше месяцев после выздоравливания.
Входными воротами для ВЕБ служит глоточное кольцо, реже вирус проходит через слизистую оболнку пищеварительного канала или непосредственно в кровь во время трансфузии. Лимфатическими сосудами и гематогенный вирус попадает в регионарные лимфатические узлы, вызывая их воспаление. На этом процесс может закончиться. В иных случаях развивается вирусемия, в результате которой вирус попадае в отдаленные лимфовузи и органы, богатые на ретикулоэндотелиальную ткань. Развивается их гиперплазия, подавляется клеточный иммунитет. Непосредственное действие вируса на эпителиальные клетки слизистых оболочек верхних дыхательных путей, полости рта и глотки вызывает катаральные их изменения. В связи с сенсибилизацией человека продуктами распада инфицированных клеток, вирусными белками и сопутствующей микрофлорой у больных возможны аллергические реакции с проявлениями в виде артралгий, сыпи на коже, отека верхних дыхательных путей.
Изредка ВЕБ способен проникнуть через гематоэнцефалический барьер и вызывать развитие серозного менингита, менингоэнцефалита, полирадикулоневрита.Чаще всего на ИМ болеют дети, как правило, возрастом 2-10 лет и люди молодого возраста. Длительность инкубационного периода может колебаться от 4 до 28 дней, но порою достигает и двух месяцев.
Лабораторная диагностика. Диагноз ИМ ставят по наличию клинических признаков и характерных гематологических изменений. В лабораторной диагностике используются традиционные серологические методы, которые основываются на феномене гетероаглютинации. Считается, что во время болезни в крови больного появляются гетерофильные антитела к эритроцитам разных животных (коня, барана, быка и тому подобное). Ставят реакцию Пауля-Буннеля с целью выявления антигемаглютининив к эритроцитам барана. Однако она не является специфической и может давать позитивный результат при онкологических заболеваниях, туберкулезе, пневмонии и др. Для диагностики используют реакцию Ловрика (микрометод реакции Пауля-Буннеля), РИФ и ИФА с целью выявления 4-кратного прироста иммуноглобулинов в парных сыворотках, а также определение с помощью ИФА IgM к ВЕБ как маркера острой инфекции.
Лимфома Беркита – злокачественная лимфоидная опухоль, которая локализуется чаще всего в почках, яичниках, верхней челюсти, поджелудочной железе, внебрюшинных лимфоузлах, мозговых оболочках, мозговом веществе.
Ее вирусная этиология была доказана в 1964 г. М. Епштейном и Дж. Барр : в биопсийном материале был выявлен герпесоподобный вирус.
Лимфома Беркита распространена в странах Центральной Африки (Уганде, Танзании, Кении), на островах Океании. Значительно реже случается в странах Европы, Латинской Америки, США. Чаще всего болеют дети 3-7-летнего возраста. Как правило, болезнь не будет поражать людей старшие 30 лет. Преимущественно болеют лица мужского пола.
Лабораторную диагностику осуществляют в РИФ, вирусную ДНК ищут с помощью молекулярной гибридизации, а серологическую диагностику проводят с помощью метода флюоресцуючих антител и ИФА.
Назофарингеальная карцинома – злокачественная опухоль, которая локализуется на латеральной стороне полости носа или в участке среднего носового хода. Имеет склонность к прорастанию в носоглотку и метастазирование в подчелюстные лимфоузлы. Лабораторная диагностика осуществляется аналогично диагностике лимфомы Беркита.
Вирус герпеса человека 6
Вирус герпеса человека (ВГ-6) выделен в США в 1986 г. S. Salahuddin и др. при культивировании in vitro мононуклеаров крови больных со СПИД, а также серонегативних больных с лимфопролиферативными, гематологическими и иммунодефицитными болезнями. По морфологическим свойствам ВГ-6 подобный другим герпесвирусам человека. Общих последовательностей нуклеотидов в первичной структуре ДНК ВГ-6 и ДНК вирусов простого герпеса, ветреной оспы-опеоясывающего герпеса не найдена. Отмечено подобие геномов ВГ-6 и цитомегаловирусу. Антигенных связей с другими герпесвирусами человека ВГ-6 не имеют.
ВГ-6 значительно отличается от других герпесвирусов за спектром чувствительных клеток. Для этого вируса характерный тропизм к лимфоидным и глиальным клеткам. ВГ-6 выделяют в первичных и перевитых клетках В- и Т-лимфоцитов, мегакариоцитов, глиальных клеток, линиях моноцитов-макрофагов, где он вызывает частичную деструкцию. ВГ-6 способен инфицировать незрелые Т-лимфоциты с фенотипами CD4, CD8, CD7, CD2, CD19, CD20, вызывая их лизис. Значение ВГ-6 в патологии человека окончательно еще не выяснено. Считают, что он приводит к лимфопролиферативному заболеванию с моноклональной пролиферацией В-лимфоцитов, синдрома хронической усталости у детей в возрасте до 3-ох лет. Данные о том, что ВГ-6 играет определенную роль в развитии лимфопролиферативных и иммуносупрессивных патологических процессов при злокачественной В-клитинний лимфоме, саркоидозе, лимфоме Ходжкина, дермопатичний лимфоаденопатии, аутоимунному тиреоидити и тому подобное. Считают, что вирус способен вызывать развитие хронической персистентной инфекции, на фоне которой возникают индуктируемые другими возбудителями болезни. Да, если есть серологические признаки активной инфекции, вызванной ВГ-6 (высокий титр антител, наличие IgM против ВГ-6), в группе больных в 56 % случаев наблюдали повышение температуры тела, в 14 % выявляли гепатит, в 15 % – дисфункцию легких, в 40 % отмечали неврологические сдвиги. Известные факты выделения ВГ-6 из слюны здоровых людей. Доказано, что у ВИЧ-инфицированных людей происходит реактивация ВГ-6 подобно реактивации цитомегаловирусу, вирусов простого герпеса и ВЕБ. При дополнительном заражении ВГ-6 in vitro Т4-лимфоцитов, ранее инфицированных ВИЧ, отмечали усиления процесса деструкции клеток. Вероятно, что и in vitro ВГ-6 будет реактивировать ВИЧ и убыстрять развитие СПИДА у ВИЧ-инфицированных.
Методы лабораторной диагностики, доступны рутинным лабораториям, еще окончательно не разработаны.
Таким образом, заболевание, вызываемые вирусами группы герпеса, – самая распространенная вирусная инфекция человека, которая длительно существуют в организме, преимущественно в латентной форме, и характеризуется разнообразиюем клинической симптоматики. Чаще всего возникают разнообразные поражения центральной нервной системы (енцефалити, миелити, энцефаломиелиты), глаз (кератит, кератоконъюнктивит, увеит), печени (гепатиты новорожденных и взрослые), слизистых оболочек (стоматит, афтозные язвы, поражения гениталий) и кожных покровов (экзема, везикулярни сиыпи) и тому подобное.
