МЕТОДИЧНА ВКАЗІВКА ДЛЯ СТУДЕНТІВ 3 КУРСУ

фармацевтичного факультету

ЗАНЯТТЯ № 11  (практичне – 6 год.)

 

Тема: Аналіз лікарської рослинної сировини, яка містить стероїдні сапоніни

Місце проведення: навчальна кімната кафедри фармакогнозії з медичною ботанікою.

Мета: Уміти виявляти сапоніни в рослинній сировині за допомогою якісних реакцій та хроматографічного методу; визначати кількісний вміст сапонінів у ЛРС. Ідентифікувати ЛРС, що містить стероїдні сапоніни.

Професійна орієнтація. Сапоніни – природні глікозиди, які утворюють колоїдні розчини й стійку піну при збовтуванні з водою та викликають гемоліз еритроцитів крові. Залежно від будови аглікону (сапогеніну) сапоніни ділять на дві групи: стероїдні (нейтральні) і тритерпенові (кислі).

В основі стероїдних сапонінів лежить ядро циклопентангідрофенантрену. Більшість сполук цієї підгрупи має спірокетальне угруповання. Ця система (С₂₇ – стероли) може бути спіростанолового нормального ряду та ізо-ряду) або фуростанолового типу. У багатьох стероїдних сапонінів у положенні 5 – 6 є подвійний зв’язок.

Сапоніни мають широкий спектр біологічної активності. Вони збільшують секреторну функцію залоз, що обумовлює їх відхаркувальний ефект, мають діуретичну, протизапальну, протимікробну, протисклеротичну та адаптогенну дію.

         Знання і вміння, одержані при вивченні даної теми, будуть необхідні для засвоєння деяких розділів фармацевтичної хімії, аптечної і заводської технології ліків, фармакології, фармакотерапії, а також у практичній діяльності провізора.

 

Базовий рівень знань та вмінь.

1.     Анатомія і морфологія  рослин (“Медична ботаніка” ІІ курс).

2.     Систематика рослин (“Медична ботаніка” ІІ курс).

3.     Фізичні і хімічні методи досліджень (“Фізична хімія” ІІ курс, “Аналітична хімія” ІІ курс).

 

Методика виконання практичної роботи – 9⁰⁰-12⁰⁰

Ілюстративний матеріал: гербарні зразки лікарських рослин, лікарська рослинна сировина

Матеріали та обладнання: мікроскопи, предметні і накривні скельця, препарувальні голки, фільтрувальний папір, зворотний холодильник, водяна баня, лійка, випарна чашка, пробірки, мірні пробірки, колби, спиртівка.

Реактиви: розчин хлоралгідрату, 10% Pb(CH₃COO)₂, баритова вода, 1% спирт. р-н холестерину, 10% CuSO₄, H₂SO₄-конц., хлороформ, розчин п’ятихлористої сурми в хлороформі, 0,5% спиртовий розчин ваніліну, H₂O-дист., 0,1н HCl, 0,1н NaOH, C₆H₆, CH₃OH, пари йоду.

 Робота 1

1.     Вивчити лікарські рослини на гербарних зразках.

2.     Провести аналіз сировини.

ОБ’ЄКТ А.

1.     Вивчити діоскорею ніпонську. Записати назву сировини, виробляючої рослини та родини.

2.     Провести аналіз кореневища з коренями діоскореї.

2.1. Описати зразок сировини (схема 12).

2.2. Записати висновки.

ОБ’ЄКТ Б.

1.     Вивчити гуньбу сінну. Записати назву сировини, виробляючої рослини та родини.

3.     Провести аналіз насіння гуньби сінної.

2.3. Описати зразок сировини (схема 10).

1.1.          Записати висновки.

 Робота 2

Хімічний аналіз ЛРС, яка містить сапоніни

Завдання. Провести якісні реакції для виявлення сапонінів на зразках сировини.

1. Приготування витягу

5 г подрібненої сировини помістити у конічну колбу на 100 мл зі зворотним холодильником. Залити 50 мл 50% спирту. Вміст колби нагрівати на киплячій водяній бані протягом 15 хв. Після охолодження профільтрувати. 20 мл фільтрату випарувати на водяній бані до 10 мл. Одержаний водний витяг використовувати для проведення проби піноутворення і деяких осадових реакцій, а також для визначення хімічної природи сапонінів. Спирто-водний витяг – для інших якісних реакцій.

2. Проба піноутворення

1,5 мл водного витягу енергійно збовтувати протягом 1 хв. Відмітити утворення стійкої піни.

3. Реакції осадження

·        1 мл водного витягу помістити у пробірку, додати 3-4 краплини 10% розчину основного ацетату свинцю.

·        До 1 мл водного витягу додати 3-4 краплини баритової води.

·        До 1 мл спиртово-водного витягу додати 1 мл 1% спиртового розчину холестерину.

При наявності сапонінів утворюються осади або каламуть.

4. Кольорові реакції

1.     Реакція Лафона. До 2 мл спиртово-водного витягу додати 1 краплину 10% розчину заліза  сульфату (ІІІ), 1 мл конц. сірчаної кислоти і обережно нагріти; відмітити появу синьо-зеленого забарвлення, що свідчить про наявність сапонінів.

2.     Реакція Сальковського. До 2 мл спиртово-водного витягу додати 1 мл хлороформу і 5-6 краплин конц. сірчаної кислоти; з’являється забарвлення від жовтого до червоного (присутні сапоніни).

3.     Реакція з п’ятихлористою сурмою. До 1 мл спиртово-водного витягу додати 0,5 мл насиченого розчину п’ятихлористої сурми в хлороформі; з’являється червоне забарвлення, що переходить у фіолетове. Це вказує на наявність сапонінів.

4.     Реакція з ваніліном і сірчаною кислотою. До 2 мл спиртово-водного витягу додати 1 мл 0,5% спиртового розчину ваніліну, 3-4 краплини конц. сірчаної кислоти; з’являється червоне забарвлення. При розведенні водою тритерпеноїди утворюють сині пластівці.

 5. Визначення хімічної природи сапонінів

 В одну з двох мірних пробірок налити 5 мл 0,1н хлористоводневої кислоти, а в другу – 5 мл 0,1н розчину натрію гідроксиду. В обидві пробірки додати по 3 краплини водного витягу і збовтати протягом 1 хв. Відмітити висоту стовпчиків піни. При наявності в сировині тритерпенових сапонінів в обох пробірках утворюється піна однакового об’єму  і стійкості, а коли присутні сапоніни стероїдної групи, то в лужному середовищі об’єм піни та її стійкість набагато більші.

Семінарське обговорення теоретичних питань – 12³⁰-14⁰⁰

 

Теоретичні питання

1. Хімічна структура сапонінів та їх класифікація.

2. Фізико-хімічні властивості сапогенінів та їх глікозидів.

3. Методи виділення сапонінв із ЛРС.

4. Якісні реакції на сапоніни.

5. Методи кількісного визначення сапонінів у ЛРС.

6. ЛРС, що містить стероїдні сапоніни.

7. Формули спіростанолу, фуростанолу, панаксотриолу.

 

Тестові завдання та ситуаційні задачі

 1. Для ідентифікації лікарської рослинної сировини провізор-аналітик приготував водні витяги та інтенсивно збовтав пробірку, при цьому утворилася стійка рясна піна. Які біологічно активні речовини наявні у сировині?

A.   Дубильні речовини

B.    Алкалоїди

C.   Антраценпохідні

D.   Жирні олії

E.    Сапоніни

2. Сапоніни діоскореї ніпонської використовують для синтезу стероїдних гормонів. Як проводять заготівлю лікарської рослинної сировини цієї рослини?

A.   Заготовляють кореневища з коренями до цвітіння

B.    Стебла зрізають не менше ніж за 10 см від землі

C.   Збирають листя та флеші впродовж усього періоду вегетації

D.   Заготовляють траву після достигання плодів

E.    Листя збирають виключно під час цвітіння.

 3. Який із тритерпенів належить до стероїдних сапонінів:

A.   Ланостан

B.    Лупеол

C.   Фріделін

D.   Кортизон

E.    α–амірин

4.  Сапоніни нерозчинні у таких розчинниках:

A.   Метанол

B.    Воді

C.   Спирт

D.   Ефір

F.    Етанол

 Еталони відповідей:

1 – А, 2 – Е, 3 – Е, 4 – D.

 

Студент повинен знати

1.     Будову сапонінів та їх класифікацію.

2.     Основні методи якісного аналізу сапонінів.

3.     ЛР і ЛРС, яка містить сапоніни.

Студент повинен вміти

1.      Використовувати методи фармакогностичного аналізу для визначення ЛРС.

2.     Розпізнавати живі ЛР та на гербарних зразках.

3.     Проводити якісні реакції на сапоніни.

 

Година самостійної роботи – 14¹⁵-15⁰⁰                 

 

Джерела інформації:

А – Основні:

1.      Фармакогнозія з основами біохімії рослин/ за ред. проф. Ковальова В.М. та інші/ – Харків: Вища школа. – 2000. – С. 412-422.

2.     Государственная Фармакопея СССР, 11-ое изд. – М.: Медицина. – 1987. – С.267, 318-320, С. 253-255, 300-303, 314-317.

3.     Державна Фармакопея України / МОЗ України. ― 1 вид., ― Х. : РІРЕГ, ― 2001. ― 556 с.

4.     Державна Фармакопея України / Державне підприємство “Науково-експертний фармакопейний центр. ― 1 вид., ― Доповн. 2. ― Х. : Державне підприємство “Науково-експертний фармакопейний центр, ― 2008. ― 620 с.

5.     Веб-сторінка університету > Інтранет > На допомогу студентам > Матеріали для підготовки до практичних занять > Кафедра фармакогнозії з медичною ботанікою > Українська > Фармація > Повний термін навчання > Фармакогнозія> 3 курс> Аналіз ЛРС, що містить cтероїдні сапоніни.

 

В – Додаткові:

1.     Солодовниченко Н.Н., Журавльов М.С., Ковальов В.М. Лікарська рослинна сировина та препарати. – Харків: Золоті сторінки. – 2001. – С. 408.

2.     Практикум по фармакогнозии: Учеб. пособие для студ. вузов / В. Н. Ковалев, Н. В. Попова, В. С. Кисличенко и др.; Под общ. ред. В. Н. Ковалева. – Х.: Изд-во НфаУ; Золотые страницы, 2003. – 512 с.

3.     Муравьева Д.А. Фармакогнозия. – М.: Медицина. – 1991. – 656 с.

4.     Коновалова О.Ю., Мітченко Ф.А., Шураєва Т.К. Біологічно активні речовини лікарських рослин: навчальний посібник з фармакогнозії для студентів вищих фармацевтичних навчальних закладів і фармацевтичних факультетів вищих медичних навчальних закладів ІІІ-ІV рівнів акредитації спеціальності 7.110 – фармація. – К.: Видавничо-поліграфічний центр “Київський університет”, 2008. – 352 с.

5.     Ковалев В.Н., Кисличенко В.С., Журавель И.А., Ковалева А.М., Исакова Т.И. Фармакогнозия: Учеб. пособ. для студ. высш. учебн. завед. Изд-во НфаУ, 2007. – 272.

6.     Гулько Р.М. Словник лікарських рослин світової медицини. Латинсько-українсько-російсько-англійський. – Львів: Ліга-Прес, 2005. – ХХІV 506 с.

7.     Бобкова І. А. Фармакогнозія: підручник / І. А. Бобкова, Л. В. Варлахова, М. М. Маньковська. – 2-е вид., перероб. та доп. – К.: Медицина, 2010. – 512 с.

 

 

Методичну вказівку склав                                                             cт. викл. Демидяк О.Л.

 

 Обговорено на засіданні кафедри          
27 серпня 2012 р. протокол № 1