Методична вказівка для студентів
медичного факультету до практичних занять
з мікробіології, вірусології та імунології
ЗАНЯТТЯ № 7 (6 год)
Теми: 1. Використання імунологічних реакцій у діагностиці інфекційних захворювань. Реакції, що базуються на феномені аглютинації та преціпітації
2. Реакцiя лiзису i зв’язування комплементу.
МЕТА: Оволодiти методиками постановки реакцiй аглютинацiї, непрямої гемаглютинацiї та вмiти iнтерпретувати їх результати.
Оволодiти методиками постановки реакцiї преципiтацiї з метою сероiдентифiкацiї, сероiндикацiї i вмiти аналiзувати їх результати.
Професійна орієнтація студентів: Імунна система являє собою складний механізм, що забезпечує захист організму людини. Імунологічні реакції, що базуються на феноменах аглютинації та преціпітації при використанні їх для ідентифікації та діагностики інфекційних захворювань надають необхідну інформацію про стан організму пацієнта і етіологію захворювання, що покращує терапевтичний процес.
Виконання практичної роботи: 9.00-12.00
Тема І.
Робота 1. Поставити орієнтовну реацію аглютинації на склі
Робота 2. Поставити реакцію аглютинації з метою серологічної діагностики.
Робота 3. Виявлення в сироватці хворого антитіл до сальмонел черевного тифу в реакції непрямої гемаглютинації.
Робота 4. Постановка реакції кільцепреципітації для визначення видової належності крові .
Робота 5. Постановка реакції термопреципітації Асколі.
Робота 6. Постановка подвійної радіальної імунодифузії в гелі за Оухтерлоні
Робота 7. Облік реакції аглютинації і РНГА.
Тема ІІ.
Робота 8. Поставити реакцію гемаглютинації
Робота 9. Поставити реакцію нейтралізації (кольорова проба)
Робота 10. Поставити реакцію звязування комплементу з парними сироватками
Програма самопідготовки студентів до заняття:
Тема І. 1. Реакцiя аглютинацiї:
а – компоненти реакцiї;
б – одержання аглютинуючих сироваток;
в – стандартнi дiагностикуми та методи їх одержання;
г – титр аглютинуючих сироваток i реакцiї аглютинацiї;
2. Реакцiя непрямої (пасивної) гемаглютинацiї (РНГА):
а – компоненти реакцiї, її механiзм;
б – якi переваги РНГА перед реакцiєю аглютинацiї?
3. Реакція коаглютинації, компоненти, практичне застосування.
4. Реакція латекс аглютинації, компоненти, практичне застосування.
5. Пряма і непряма реакція Кумбса. Компоненти. Практичне значення.
6. Пряма і непряма реакція імунофлуоресценції.компоненти, механiзм
та практичне використання.
7. Компоненти реакцiї преципiтацiї, її механiзм.
8. Реакцiя кільцепреципітації та термопреципітації Асколі..
9. Реакцiя преципiтацiї в агарi:
а – проста iмунодифузiя (реакцiя Удена);
б – проста радiальна iмунодифузiя (реакцiя Манчiнi);
в – подвiйна радiальна iмунодифузiя (реакцiя Оухтерлонi).
10. Імуноелектрофорез
Тема ІІ.
Використання iмунологiчних реакцiй у дiагностицi iнфекцiйних захворю-вань. Реакцiя лiзису i зв’язування комплементу.
1. Реакцiї, що базуються на феноменi лiзису (гемолiзу, бактерiолiзу, цитолiзу):
а – компоненти реакцiй;
б – механiзм реакцiй i роль комплементу;
в – оцiнка результатiв;
2. Реакцiя зв’язування комплементу:
а – компоненти реакцiї;
б – характеристика дослiдної та iдикаторної систем;
в – роль комплементу i схема його титрування;
г – визначення титру гемолiтичної сироватки;
д – оцiнка результатiв РЗК;
е – практичне значення РЗК.
Перерва 12.00-12.30
Семінарське обговорення теоретичних питань: 12.30-14.00
Перерва: 14.00-14.15
Самостійна робота студентів: 14.15-15.00
Розв’язування ситуаційних задач з кожної теми, розбір завдань тестових ліцензійних іспитів «Крок», оцінювання студентів, які не склали напередодні тестовий контроль за системою «Moodle», відпрацювання та прийом практичних навичок (матрикули).
Зразки тестових завдань та ситуаційних задач:
Тема І:Використання iмунологiчних реакцiй у дiагностицi iнфекцiйних захворю-вань. Реакцiя лiзису i зв’язування комплементу.1. Реакція гемолізу вважається позитивною
А. при наявності осаду еритроцитів
B. коли рідина у пробірці набуває червоного кольору
С. при помутнінні розчину
D. при наявності аглютинації
2. Основними компонентами РЗК є:
А. антиген, комплемент, еритроцити барана, гемолізин
B. еритроцити барана, гемолізин, антиген, антитіло, комплемент
С. комплемент, спец. сироватка, гемолітична сироватка, еритроцити барана
D. гемолітична сироватка, курячі еритроцити, комплемент
3. Перед постановкою РЗК необхідно провести титрування:
А. антигена, комплемента
В. гемолізину, антигена
С. сироватки хворого, еритроцитів
D. Вірні А і В
Е. Вірні В і С
4. Виберіть компоненти, які необхідні для постановки реакції лізису:
А. антитіло, антиген, α-лізин
B. спец. антитіла, клітини, комплемент
С. бактерії, спец. сироватка, лізоцим
D. антиген, антитіло, комплемент
5. При реакції лізису клітина ушкоджується:
А. цитолізином
B. лізоцимом
С. β-лізином
D. комплементом
6. У гемолітичній сироватці містяться:
А. бактеріолізини
B. цитолізини
С. гемолізини
D. спірохетолізини
7. Основним методом одержання гемолітичної сироватки є
А. гіперімунізація барана еритроцитами
B. імунізація кроликів бактеріями
С. введення морським свинкам вірусів
D. імунізація кроликів еритроцитами барана
Тема ІІ :
1. З якою метою використовуються серологічні реакції?
А – для серологічної ідентифікації та діагностики
B – для профілактики інфекційних захворювань
C – для лікування імунодефіцитів
D – всі відповіді вірні
Е – вірні відповіді 1 і 2
2. Для реакції коаглютинації використовують наступні мікроорганізми:
А – кишкові палички
B – сальмонели
C – менінгококи
D – стафілококи
Е – шигели
3. У реакції преціпітації у якості антигенів беруть участь:
А – корпускулярні АГ
B – цілі мікроорганізми
C – молекулярні антигени
D – всі перераховані
Е – невірна жодна з відповідей
Вихідний рівень знань та вмінь
Студент повинен знати:
1. Загальну характеристику і класи імуноглобулінів
2. Компоненти реакцій аглютинації
3.Взаємодію клітин в імунній відповіді
4. Реакції, що базуються на феноменах преципітації і аглютинації, їх діагностичне значення, застосування і інтерпритацію результатів
9. Студент повинен вміти:
1. Визначати рівень імуноглобулінів у сироватці крові в реакції радіальної імунодифузії Манчіні
2. Поставити орієнтовну реакцію аглютинації на склі, реакцію аглютинації для серологічної діагностики, реакцію кільцепреципітації для визначення видової належності крові., інтерпритувати результати реакцій Асколі, Оухтерлоні, аглютинації, РНГА.
Вірні відповіді на тести та ситуаційні задачі:
Тема І 1. A, 2. В, 3 D, 4.D, 5.D, 6.C, 7.D
Тема ІІ 1. А, 2. D, 3. C
Джерела інформації:
Основні А.
1. І.О. Ситник., С.І.Климнюк, М.С. Творко // Мікробіологія, вірусологія, імунологія, Тернопіль, 1998.-С.120-124, 129-132;
2. Тимаков В.Д., Левашев В.С. // Микробиология.-М., 1983.-С 145-205;
3. С.І.Климнюк І.О.Ситник, М.С.Творко Практична мікробіологія Тернопіль, “Укрмедкнига”, 2004.-С.125-157;
4. Творко М.С., С.І. Климнюк , Н.І.Ткачук Основи імунології, Тернопіль, ТДМУ, «Укрмедкнига», 2009, С. 242-296
5. Медична мікробіологія, вірусологія та імунологія за ред академіка НАН України В.П. Широбокова, «Нова Книга», Вінниця, 2011. – С. 272-292.
Додаткові В:
1.Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. -С-П.,2000.
2. Кривошеин Ю.С. и др. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии и лабораторной диагностике инфекционных болезней. К, 1996.
Методичну вказівку склали доц. Творко М.С., доц. Романюк Л.Б.
Затверджено на засіданні кафедри
24.12.2012 р. протокол № 5
Переглянуто і затверджено на засіданні кафедри
«24.09.2013 р. Протокол №3